NGS檢測(cè)結(jié)果顯示，新診斷的482例患者中，430例（89.2%）至少攜帶一種突變，每個(gè)人平均攜帶2.9個(gè)突變，最常見(jiàn)的突變?yōu)镹PM1、DNMT3A、FLT3和NRAS（圖1A）。430例患者初診和CR期的2次NGS檢測(cè)結(jié)果顯示，51.4%的患者在CR期突變持續(xù)存在，且突變等位基因頻率存在很大的差異（0.02%~47%，圖1B）。DTA（DNMT3A、TET2、ASXL1）突變最常見(jiàn)，頻率通常高于2.5%，與白血病幼稚細(xì)胞的比例不一致（<5%）；反之，IDH1、IDH2、STAG2、TP53和其他基因突變偶有突變頻率高于2.5%的持續(xù)存在，這些基因突變頻率的改變與形態(tài)學(xué)CR狀態(tài)基本一致。DTA突變通常與年齡相關(guān)的克隆性造血相關(guān)，持續(xù)的DTA突變可能代表了非白血病克隆。在初診時(shí)同時(shí)存在DTA和非DTA突變的133例患者中，CR期非DTA突變一般被清除，但其中90例患者（67.7%）在CR期通常仍可檢測(cè)到DTA突變，該結(jié)果與CR期帶有DTA突變的殘余細(xì)胞代表非白血病克隆而非持續(xù)性惡性疾病的觀點(diǎn)一致。

圖1初診和CR期的基因突變（A）以及CR期的突變等位基因頻率（B）

持續(xù)的DTA突變與4年的復(fù)發(fā)率沒(méi)有顯著的相關(guān)性。然而，在CR期持續(xù)存在DTA突變的患者中，同時(shí)持續(xù)存在非DTA突變對(duì)AML復(fù)發(fā)具有較高的預(yù)測(cè)價(jià)值（4年復(fù)發(fā)率，檢測(cè)到的為66.7%，未檢測(cè)到的 39.4%；P = 0.002），是預(yù)后評(píng)估的獨(dú)立指標(biāo)（圖2A）。隨后，研究者評(píng)估了持續(xù)存在的非DTA突變與復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)的關(guān)系，發(fā)現(xiàn)任何等位基因頻率的非DTA突變的持續(xù)存在都與AML的復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)增加密切相關(guān)（4年復(fù)發(fā)率，檢測(cè)到的為55.7%，未檢測(cè)到的為34.6%；P=0.001），無(wú)復(fù)發(fā)生存率（4年無(wú)復(fù)發(fā)生存率56.7%，無(wú)復(fù)發(fā)生存率36.6%；P=0.006）和總生存率降低（4年總生存率，檢測(cè)到的65.3%，未檢測(cè)到43.7%；P=0.001）密切相關(guān)（圖2B）。

為了評(píng)估結(jié)果的可重復(fù)性，研究者對(duì)另一隊(duì)列進(jìn)行非DNA突變與復(fù)發(fā)率、無(wú)復(fù)發(fā)生存率和總生存率關(guān)系的驗(yàn)證，二者的結(jié)果一致（圖2B，2C）。在試驗(yàn)組和驗(yàn)證組的430名患者中，28.4%的患者在CR期檢測(cè)到持續(xù)存在的非DTA突變。

圖2 持續(xù)存在DTA突變患者的復(fù)發(fā)率（A），所有患者的復(fù)發(fā)率（B）和總生存率（C）

目前，流式細(xì)胞術(shù)在CR期AML患者復(fù)發(fā)預(yù)測(cè)方面的應(yīng)用日益增多。研究者通過(guò)對(duì)340例患者進(jìn)行NGS和流式細(xì)胞檢測(cè)，比較NGS非DTA突變和流式MRD陽(yáng)性的一致性。結(jié)果顯示，69.1%的患者的檢測(cè)結(jié)果一致（30例檢測(cè)到殘留，205例未檢測(cè)到殘留），而64例患者僅NGS檢測(cè)到持續(xù)性非DTA突變，41例患者僅在流式細(xì)胞術(shù)中檢測(cè)到MRD陽(yáng)性。在兩種方法檢測(cè)均為陽(yáng)性的患者中，4年復(fù)發(fā)率為73.3%；僅測(cè)序的陽(yáng)性患者中，4年復(fù)發(fā)率為52.3%；僅流式檢測(cè)陽(yáng)性的患者中，4年復(fù)發(fā)率為49.8%。兩種方法檢測(cè)均陰性的患者中，4年復(fù)發(fā)率為26.7%（圖3）。因此，聯(lián)合使用NGS和流式細(xì)胞術(shù)進(jìn)行MRD監(jiān)測(cè)，對(duì)于AML患者的疾病復(fù)發(fā)、無(wú)復(fù)發(fā)生存和總生存率具有獨(dú)立的預(yù)后價(jià)值。

圖3 NGS和流式細(xì)胞術(shù)用于MRD監(jiān)測(cè)的復(fù)發(fā)預(yù)測(cè)效能

針對(duì)482例AML患者（初診與CR期）的靶向NGS檢測(cè)結(jié)果顯示，89.2%的患者至少攜帶一個(gè)基因突變，51.4%初診突變陽(yáng)性的患者在CR期突變持續(xù)存在，其中DTA突變（DNMT3A、TET2和ASXL1基因）等位基因頻率較高，DTA突變常與年齡相關(guān)的克隆性造血相關(guān)，但CR期的DTA突變與4年復(fù)發(fā)率增加無(wú)關(guān)。因此，DTA突變不是AML患者合適的MRD監(jiān)測(cè)指標(biāo)，而非DTA突變的持續(xù)存在是AML患者復(fù)發(fā)和生存的獨(dú)立預(yù)后不良因素。NGS與流式細(xì)胞檢測(cè)聯(lián)合用于AML患者的MRD檢測(cè)有更顯著的預(yù)后預(yù)測(cè)價(jià)值。

參考文獻(xiàn)：

Jongen-Lavrencic M, Grob T, Hanekamp D, et al. Molecular minimal residual disease in acute myeloid leukemia[J]. New England Journal of Medicine, 2018, 378(13): 1189-1199.