血液腫瘤是一種高度異質性疾病，大部分患者經(jīng)過治療后可以達到完全緩解。血液學完全緩解后，患者的骨髓、外周血或其他髓外組織中仍然存在著少量的白血病細胞，稱為微小殘留?。╩easurable residual disease，MRD）。MRD在血液腫瘤復發(fā)預測，療效評估方面發(fā)揮著十分重要的作用（圖1），白血病細胞負荷越高，復發(fā)風險越大，藥物療效越差。

圖1 MRD監(jiān)測在白血病復發(fā)預測中的意義

 目前的MRD監(jiān)測方法主要有多參數(shù)流式細胞術（multiparameter flow cytometry，MFC）、熒光實時定量聚合酶鏈式反應（quantitative polymerase chain reaction，qPCR）和二代測序（next generation sequencing，NGS）。

白血病細胞具有異常的抗原表達，稱為白血病相關免疫表型（leukemia-associated immunophenotypes，LAIPs）。LAIPs分為抗原非同步表達、抗原的跨系表達、正?？乖磉_強度改變和抗原表達缺失4類。流式細胞術以LAIPs為基礎進行MRD監(jiān)測。

MFC監(jiān)測MRD的適用范圍廣，檢測周期短，特異性高，但是監(jiān)測指標缺乏標準化，需要專業(yè)分析人員，且治療后的殘留白血病細胞免疫表型可能發(fā)生改變（抗原漂移），造成假陽性或假陰性。

正常細胞與血液腫瘤細胞具有不同的分子生物學異常，正常細胞中不表達或低表達的mRNA轉錄本在白血病細胞中呈現(xiàn)高表達，例如急性髓系白血病患者中的WT1高表達，正常B/T淋巴細胞的IG/TCR重排多樣化，B/T細胞淋巴瘤的IG/TCR重排單一化（圖2）；血液腫瘤細胞中還存在基因突變和基因融合。在具有基因突變、融合、過表達和重排的血液腫瘤患者中，可采用qPCR技術進行MRD監(jiān)測。

qPCR靈敏度高，特異性好，監(jiān)測速度快，但是覆蓋面窄，需要多種不同的引物和探針，且受擴增效率和背景表達的影響較大。由qPCR發(fā)展而來的液滴數(shù)字PCR屬于絕對定量方法，可檢測基線復雜和含量極低的核酸序列，但也存在覆蓋面窄，標志物多等局限性。

圖2 正常細胞與B/T腫瘤細胞基因重排

血液腫瘤患者體內經(jīng)常存在多個突變，而qPCR技術通量低，一般一次只能檢測一個外顯子突變。NGS技術通量高，可同時檢測多個突變，提高效率的同時也能更全面地了解患者的遺傳信息。然而，NGS的檢測費用較高，還可能引入一些原始樣本基因組并不存在的錯誤，導致假陽性。因此，檢測實驗室應建立標準化實驗和數(shù)據(jù)解讀流程，提高檢測的準確率。

MRD監(jiān)測技術的發(fā)展迅速，臨床應用也趨于常規(guī)。目前的MRD監(jiān)測方法較多，每種方法都有各自優(yōu)點和局限性（表1）。血液腫瘤相關診療指南推薦，在治療的多個階段多頻次進行MRD監(jiān)測，包括誘導治療完成后、鞏固治療期間、移植前、全部治療完成后，從而更好地了解白血病的動態(tài)變化、更精確地進行風險評估，輔助治療方案選擇。

表1 MRD監(jiān)測方法的特點

由于每個患者白血病細胞的特異標志不盡相同，加之白血病細胞還帶有很多正常細胞的標志以逃脫機體的免疫監(jiān)視。因此，如何確定白血病細胞特有的標志最為關鍵。MRD監(jiān)測的前提是在初診時找到患者白血病細胞特有的標志，例如，采用流式細胞學方法，首先要在初診時分析白血病細胞的十幾種標志，然后找出幾種標志的特定組合作為該白血病細胞的特有標志，后續(xù)進行追蹤觀察。

參考文獻

1. van Dongen JJ, van der Velden VH, et al. Minimal residual disease diagnostics in acute lymphoblastic leukemia: need for sensitive, fast, and standardized technologies. Blood, 2015, 125(26): 3996-4009.

2. Ye B, Smerin D, et al. High-throughput sequencing of the immune repertoire in oncology: applications for clinical diagnosis, monitoring, and immunotherapies. Cancer lett., 2018, 416: 42-56.

3. Schnittger S, Kern W, et al. Minimal residual disease levels assessed by NPM1 mutation-specific RQ-PCR provide important prognostic information in AML. Blood, 2009, 114(11): 2220-2231.

4. Roloff GW, Lai C, et al. Technical advances in the measurement of residual disease in acute myeloid leukemia. J Clin Med, 2017, 6(9): 87.