最近，新冠病毒檢測假陰性問題討論度頗高。核酸檢測一直被認為是感染性疾病診斷的金標準。通常，核酸檢測試劑盒的準確度可達95%以上。為什么新冠病毒呼吸道的假陰性率高呢？這其中包含了很多方面的原因，比如試劑盒的檢測限、采集標本的質量、標本保存運送情況、檢測實驗操作、結果判讀等很多方面。

其中采集標本的質量是非常重要的因素。拭子上病毒的量越多，就越容易檢測出來。相反，拭子上病毒的量太少，就可能出現(xiàn)假陰性的情況。影響拭子上病毒量的因素主要有兩個。

不同的病程，不同部位，可采集到的病毒量都有很大差別。根據(jù)《新型冠狀病毒實驗室檢測技術指南》，呼吸道檢測樣本的類型有上呼吸道標本（咽拭子、鼻拭子、鼻咽抽取物），下呼吸標本（深咳痰液、呼吸道抽取物、支氣管灌洗液、肺泡灌洗液、肺組織活檢標本）。新冠病毒主要感染下呼吸道及肺部，下呼吸道采集優(yōu)于上呼吸道采集，病毒多，最易檢出。但采集越深部的樣本，對患者的創(chuàng)傷越大。

尤其對于上呼吸道標本，病毒載量本來就比較低，如果采集操作不規(guī)范，便會導致實際上采到的拭子上的病毒量更少。由于采集技術不過關，而出現(xiàn)檢測的假陰性，在呼吸道檢測中屢見不鮮。

雖然下呼吸道標本更優(yōu)，但咽拭子采集速度快，采集容易，創(chuàng)傷更小，對于患者和標本采集人員都更為方便。因此上呼吸道標本占了相當高的比例。如果能夠提高上呼吸道采樣技術能力，從而降低假陰性率，這將非常有意義。以下是口咽拭子和鼻咽拭子采集的方法和注意事項。

1. 準備清水，讓患者漱口（不能漱口者少量飲水并咽下）；

2. 取出咽拭子，讓患者頭部微仰，嘴張大，發(fā)“啊”音，露出兩側咽扁桃體。

3. 手持拭子在患者兩側咽扁桃體以及咽后壁各旋轉拭抹3~5次。

4. 迅速將拭子采集端浸入保存液中，拭子沿斷點折斷，棄去尾部。

5. 旋緊管蓋，輕輕搖晃，并用封口膜封閉管蓋。

6. 按照試劑盒說明的環(huán)境條件進行保存，并及時送檢。

1.標本采集管先貼好條形碼，盡可能采集患者發(fā)病3d以內的口咽拭子標本。

2.為減少暴露風險，采集人員應加強個人防護。

3.在操作前應向患者及家屬做好解釋工作。

4.拭子必須充分接觸兩側咽扁桃體和咽后壁。

5.采集時，拭子應在兩側扁桃體和咽后壁上充分旋轉，旋轉的力度應把握好。

1. 清除鼻腔前端的分泌物（如必要）；

2. 以拭子測量鼻尖到耳垂的距離，并用手指做標記。

3. 將拭子以垂直鼻子（面部）方向插入鼻腔，從下鼻道深入抵達鼻咽后壁，直到標記位置或觸壁遇阻。（拭子深入距離最少應達耳垂部位到鼻尖長度的一半）。

4. 使拭子在鼻內停留15~30s，輕輕旋轉3~5次。

5. 迅速將拭子采集端浸入保存液中，拭子沿斷點折斷，棄去尾部。

6. 旋緊管蓋，輕輕搖晃，并用封口膜封閉管蓋。

7. 按照試劑盒說明的環(huán)境條件進行保存，并及時送檢。

1. 標本采集管先貼好條形碼，盡可能采集患者發(fā)病3d以內的鼻咽拭子標本。

2. 為減少暴露風險，采集人員應加強個人防護，并可選擇側位站立。

3. 采集時，拭子應朝垂直鼻子（面部）方向，而不是頭頂方向伸入。

4. 采集時，拭子應在鼻粘膜上充分旋轉，旋轉的力度應把握好。

除了標本采集，標本的保存和運送過程也很關鍵，采集的拭子應盡量放在保存液中。有些情況下實驗室會用生理鹽水代替保存液，這點不建議。因為保存液中一般會有蛋白變性劑和核酸酶抑制成分，蛋白變性劑可使病毒失活并釋放其核酸，核酸酶抑制成分可維持標本的穩(wěn)定性，使核酸不易發(fā)生降解。而生理鹽水就沒有這些功能了。

標本采集后應盡快送檢。如不能馬上檢測，那么標本需要在合適的溫度（具體參照說明書）下進行保存，以防止RNA降解。如果標本送檢人員不了解RNA極易降解的特性，很可能發(fā)生送檢不及時、保存溫度不當而使核酸發(fā)生降解的情況。此時，無論使用多么精準的檢測試劑盒都可能報出假陰性的檢測結果。

另外一點就是提取前的滅活處理。為了減小檢測人員的職業(yè)暴露風險，最好是將病毒先進行滅活，再進行后續(xù)實驗。目前很多實驗室采用高溫滅活的方式，這個高溫滅活過程可能會降低檢測的陽性率。建議使用有滅活功能的拭子保存液，省卻高溫滅活的環(huán)節(jié)。

最后，分子檢測實驗室在核酸提取、擴增等步驟都要遵循標準化操作規(guī)程，才能得到更準確的檢測結果，為臨床和患者出具可信的報告。